020-28906991  
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产品详情

人 SV40 转染成骨细胞HFOB1.19(STR鉴定已通过)

品牌: 欣源(BIOSPECIES)
货号: HFOB1.19
规格: 1*10^6
单位:
单价/元: 2500
产品详情

细胞介绍

0.6mg/ml新霉素G418存在下,用温度敏感的表达载体pUCSVisA58转染自然流产的胎儿四肢组织,建立了此细胞系。在33.5℃温度下细胞分裂很快,而在限制温度39.5℃下细胞极少分裂或不分裂。这些细胞具有分化为表达造骨细胞表型的成熟造骨细胞的能力。这些细胞提供了一个同质化的快速增殖模型系统,用于研究正常人造骨细胞的分化,造骨细胞生理和激素,生长因子,和对造骨细胞的功能及分化有影响的细胞因子

细胞特性

1) 来源:成骨细胞

2) 形态贴壁生长

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格:T25或者1mL冻存管包装

运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:1干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;2存活细胞收到后应继续生长传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。

细胞用途:仅供科研使用。

细胞接受后的处理:

1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25置于37培养约2-3h

3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的完全培养基。

4) 如果细胞长满(80%-90%)请及时进行细胞传代。

5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

                       

细胞培养步骤

一.培养基培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM/F12培养基;优质胎牛血清,10%添加0.3mg/mL G418双抗1%

2) 培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:34摄氏度培养箱湿度为70%-80%

3) 冻存液90%血清10%DMSO现用

二. 细胞处理

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中加入8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化

3. 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1215的比例分到新的8ml培养基的新皿中或者瓶中

3) 细胞冻存:细胞生长状态良好时,进行细胞冻存

下面T25瓶为例;

      1细胞冻存时,弃去培养基后PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

      21000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项:

1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系

2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。


广州速研生物科技有限公司
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