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产品详情

A20 小鼠 B 细胞淋巴瘤细胞(提供种属鉴定报告)

品牌: 欣源(BIOSPECIES)
货号: A20
规格: 1*10^6
单位:
单价/元: 1800
产品详情

细胞特性

1) 来源:小鼠

2) 形态半贴壁

3) 含量:>1x106 细胞数

4) 规格:T25或者1mL冻存管包装

5) 用途:仅供科研使用。

细胞接收后的处理:

1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)请在45X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。   收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶12传代 。

                       

一.培养基培养冻存条件准备:

1) 准备1640养基;优质胎牛血清,10%双抗1%

2) 培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度培养箱湿度为70%-80%

3) 冻存液92%血清,8%DMSO现用92%完全培养基+8%DMSO

4) 注意事项:1.细胞半贴壁圆形生长,部分圆形悬浮,传代均可收集,换液将悬浮收集离心打回原瓶,若贴壁细胞多状态好,可不要悬浮细胞。2.该细胞生长速度快,注意培养基消耗。3.传代换液可用预热PBS清洗。

二.细胞处理

1) 冻存细胞的复苏::

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培养瓶中T251-2mLT752-3mL置于37培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化

3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例;

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。


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